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Bio-rad PCR儀售后維修,Bio-rad PCR儀維修中心。
Bio-rad PCR儀華北地區總代理,公司總部位于北京,在上海,哈爾濱設有售后維修分部。
Bio-Rad是一家生命科學公司,專注于研發和銷售實驗室的液體處理、樣品處理和細胞處理的儀器、耗材和服務。主要產品包括移液器、自動分液系統、分液器、離心機、混勻器和光度計、DNA擴增儀,以及**溫冰箱、發酵罐、生物反應器、CO2培養箱、生物搖床和細胞顯微操作系統。相關耗材產品如移液吸頭、離心管、微量反應板和一次性生物反應器,配合專業儀器的使用,確保為客戶提供高質量的整體解決方案。
Bio-RadPCR儀產品廣泛應用于學術科研和商業研究機構,如制藥、生物技術以及化學分析和食品行業,以及臨床和環境分析實驗室、法醫檢測和進行需要過程分析、生產及質控的工業生產實驗室。
產品特性:
圖形化程序編輯、直觀簡便,中文操作界面
通用樣品槽,適用 0.2 ml/0.5 ml PCR 管和 PCR 板梯
度模塊采用 SteadySlope? 梯度技術,12 列溫度梯度
flexlidTM 熱蓋可自動調節高度,適應不同實驗耗材
TSP 樣品溫控保護技術,減少非特異性擴增
一臺 Mastercycler nexus 梯度或普通PCR 儀可連接
兩臺 Mastercycler nexus eco 經濟型 PCR 儀
USB 接口可連接鼠標、U 盤和打印機等,方便儀器操作、數據傳輸和程序擴展
具 E-mail 提醒功能
可選配 USB 加密狗,對半導體元件進行快速檢測
Bio-Rad PCR儀 - 技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
但是,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,每次循環都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,制約了PCR技術的應用和發展。發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
Bio-Rad PCR儀 - 常見故障處理
1. cDNA產量的很低
可能的原因:
*RNA模板質量低
*對mRNA濃度估計過高
*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足
*同位素磷32過期
*反應體積過大,不應超過50μl
2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺
**常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系
*與反應起始時RNA的總量及純度有關
*建議在試驗中加入對照RNA
*鏈的反應產物在進行PCR擴增時,在總的反應體系中的含量不要超過1/10
*建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物(GSP)用于鏈合成。由于RNA模板存在二級結構,如環狀結果,有可能導致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉錄酶無法從此引物進行有效延伸。
*目的mRNA中含有強的轉錄中止位點,可以試用以下方法解決:
a. 將鏈的反應溫度提高至50℃。
b. 使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進行鏈反應。
3. 產生非特異性條帶
*用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對照的PCR結果也顯示同樣條帶,則需要用DNase I重新處理樣品。
*在PCR反應中,非特異的起始擴增將導致產生非特異性結果。在低于引物Tm 2至5℃的溫度下進行退火,降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結果的產生。
*由于mRNA剪切方式的不同,根據選擇引物的不同將導致產生不同的RT-PCR結果。
4. 產生彌散(smear)條帶
*在PCR反應體系中鏈產物的含量過高
*減少引物的用量
*優化PCR反應條件/減少PCR的循環次數
*在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時,其產生的寡核苷酸片段會產生非特異性擴增,一般會顯示為彌散背景。
5. 產生大分子量的彌散條帶
*大多數情況下是由于退火溫度過低而導致的非特異性的起始及延伸產生的
*對于長片段的PCR,建議將反應體系中cDNA的濃度稀釋至1:10(或1:100-1:200)
6. 在無反轉錄酶的情況下,對照RNA獲得擴增結果
*通常是由于對照RNA中含有痕量DNA而導致的。由于進行體外轉錄時不可能將所有的DNA模板消除。建議可將鏈cDNA稀釋1:10、1:100、1:1000倍以消除DNA污染所造成的影響。
*有可能是引物二聚體的條帶
7. 擴增產物滯留在加樣孔中
*有可能是由于模板量過高而導致PCR結果產生了高分子量的DNA膠狀物。建議將鏈結果至少稀釋100倍再進行二次擴增。
*另外,在二次PCR時使用的退火溫度如果比引物的Tm值低5℃,可以將退火溫度適當增高或進行熱啟動以提高特異性。
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