2DWestern blot概述

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot相結(jié)合的一項技術(shù)。一般實驗流程為抗原蛋白混合物經(jīng)雙向電泳分離，然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上，再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可檢測出抗原等電點或分子量發(fā)生的微小變化，在蛋白翻譯后修飾研究領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用；而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)，還可能從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

 

技術(shù)服務(wù)流程

 

2DWestern blot技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

1、蛋白質(zhì)抽提與定量；  2、雙向電泳；  3、轉(zhuǎn)膜，封閉，孵育，顯示成像。 

送樣須知

樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融，妥善保存，用干冰或液氮包裝寄送；廣州本地客戶可上門收樣。   注：接收組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等樣品；相應(yīng)一抗如果公司抗體庫里沒有，也需要客戶自己提供。 

2DWestern blot技術(shù)服務(wù)報告內(nèi)容

1、蛋白質(zhì)定量結(jié)果及電泳上樣量；  2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果； 3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

 

2DWestern blot實驗服務(wù)案例

 

實驗服務(wù)周期及收費標(biāo)準(zhǔn)

咨詢本公司QQ/電話：400 699 1663

 

質(zhì)量承諾

提供清晰、客觀的2D Western blot結(jié)果。

 附：2DWestern blot實驗步驟

1、樣本制備，盡可能溶解全部蛋白質(zhì)，破壞蛋白與蛋白間的相互作用，避免其他雜質(zhì)的干擾，與IEF兼容等。2、雙向電泳的主要步驟，**向電泳（IEF），膠條平衡，第二向電泳SDS-APGE。3、第二向電泳結(jié)束后，取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，可選濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用NC膜和PVDF膜。4、封閉，5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時（室溫）或過夜（4度）。5、一抗孵育，根據(jù)抗體說明書選擇孵育時間，常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜，一抗孵育后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。6、二抗孵育：根據(jù)一抗選擇合適的二抗（抗鼠、抗人、抗兔等），室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。7、顯影：將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上，暗室中將膠片置于膜上，蓋上壓片夾，曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影，直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶，清水漂洗后在定影液中定影，曝光時間需綜合考慮蛋白質(zhì)的上樣量，抗體稀釋濃度，抗體孵育時間等。8、定影后，清洗膠片，晾干，標(biāo)定marker，掃描圖片和2D Western blot圖片分析。查看部分客戶發(fā)表SCI論文