慢病毒包裝

一、慢病毒服務(wù)簡介

慢病毒（Lentivirus）載體是以人類免疫缺陷I型病毒(HIV-1)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因載體。它是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，能使外源基因整合入宿主的基因組穩(wěn)定、長期表達，但卻比一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度和更廣的宿主范圍。攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝載體(表達病毒包裝所需輔助蛋白)一同轉(zhuǎn)染包裝細胞，即可進行病毒的包裝；經(jīng)收集和濃縮的慢病毒液可以直接用于感染宿主細胞或活體動物模型。

輝駿生物使用的慢病毒包裝系統(tǒng)是4質(zhì)粒包裝系統(tǒng)，包括1個慢病毒表達載體和3個慢病毒包裝載體(分別表達病毒包裝必需的蛋白Gag/Pol、Rev和VSV-G)，包裝細胞為293T細胞。

輝駿生物提供包含多種熒光基因(如GFP或RFP等)、多種抗性篩選標簽和多種啟動子的慢病毒載體，可充分滿足客戶不同實驗設(shè)計的要求。

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二、慢病毒表達系統(tǒng)的特點

1> 能將外源基因有效地整合入宿主染色體上，介導目的基因穩(wěn)定、長期的表達；

2>慢病毒有更廣泛的宿主范圍，能夠有效地感染分裂細胞、非分裂細胞，特別適合于一些難轉(zhuǎn)染的細胞（如原代細胞、干細胞、不分化的細胞）和對腺病毒感染具有較強免疫反應(yīng)的細胞（如樹突狀細胞、單核細胞和間充質(zhì)干細胞）等；

3> 適用范圍更廣，不僅能用于體外實驗，還能用于活體動物模型。

4>不需要轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)導效率高，目的基因整合到宿主細胞基因組的概率大大增加；

5>可用于研究基因的過表達、microRNA過表達和RNAi等。

6>利用慢病毒建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的時間較常規(guī)真核表達載體更短，能大大縮短實驗周期、提高實驗效率。

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三、慢病毒技術(shù)整體流程

A.慢病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)客戶的不同需要，將目的基因片段連接至慢病毒載體；

B.慢病毒包裝：重組病毒質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染293T細胞進行包裝；收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，濃縮后進行滴度測試，得到滴度≥1×10⁸TU/mL的慢病毒液；

C.穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的建立：分別使用實驗組和對照組慢病毒感染細胞，利用抗生素初步篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，細胞分選得到單克隆細胞株，建立實驗組和對照組的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。

???在慢病毒的包裝系統(tǒng)中，慢病毒表達載體攜帶病毒包裝和復制所需的順式作用元件和外源基因表達盒，3個包裝質(zhì)粒反式提供病毒包裝必需的蛋白。輝駿生物提供多種慢病毒表達載體，具體元件如下圖所示，除此之外，客戶還可以根據(jù)需要更換啟動子、熒光基因或抗性基因。

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五、慢病毒技術(shù)服務(wù)項目

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表1慢病毒服務(wù)項目及內(nèi)容

特別提醒：

（1）基因過表達慢病毒服務(wù)適用于目標基因長度為2000bp以下的片段，2000bp以上的請具體咨詢；

（2）我公司亦可進行基因釣取和WB檢測服務(wù)，但費用不包含在總套餐之內(nèi)，需根據(jù)實際情況收費；

（3）客戶如對所需病毒量（TU）及病毒液滴度范圍有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×10⁸~1×10⁹TU/mL之間，規(guī)格為1mL；

（4）若實驗材料為原代細胞和需要特殊培養(yǎng)的細胞，請具體咨詢；

（5）客戶亦可根據(jù)特殊要求進行慢病毒產(chǎn)品定制服務(wù)。

六、實驗結(jié)果提交

實驗結(jié)束后，我公司會提交完整的實驗結(jié)果，包括：

1. 客戶定制的相應(yīng)載體、病毒液或穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株；

2. 慢病毒液滴度測定報告單；

3. 慢病毒載體的測序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜；

4. 全部實驗圖片；

5. 詳細實驗報告。

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