一、SILAC研究蛋白質相互作用概述
????????SILAC?(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,?SILAC) 結合免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP),來尋找互作蛋白,是SILAC在定量蛋白質組學研究基礎上的進一步應用。基本思路是通過質譜鑒定及分析蛋白的相對表達量來判斷某一蛋白是否與誘餌蛋白特異結合,當實驗組與對照組中某個蛋白質含量達到統計學差異時,即可判定該蛋白質與誘餌蛋白質存在互作。
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二、與傳統的免疫共沉淀(CoIP)或Pulldown相比,SILAC-IP有以下優勢
??1、特異性強,假陽性極低;??????
??2、高通量,液相與質譜連用,能**限度的尋找到相互作用的蛋白質;????
??3、靈敏度高;
? 4、能直接檢測出與bait蛋白互作的其它蛋白的相對含量。
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三、SILAC研究蛋白質相互作用技術流程
實驗流程:
??????????????????圖4:SILAC分析蛋白質相互作用的質譜峰圖及被鑒定蛋白的生物信息分析
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五、SILAC研究蛋白質相互作用技術服務內容
1、細胞同位素標記;(本公司出售L、M、H型Lys和Arg)
2、樣本制備與定量;
3、SDS-PAGE分離、酶切、LC-MS/MS分析;
4、蛋白定性及定量分析;
5、互作蛋白的生物信息學分析
6、實驗報告整理。
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六、SILAC適用
????SILAC能標記活的可傳代細胞、細菌等材料,不能標記組織、體液等樣本,詳情請咨詢我司。
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七、實驗服務報告內容
??1、蛋白質鑒定;
??2、SILAC鑒定相互作用蛋白質的分析結果;??
??3、顧客指定蛋白質對應的質譜峰圖;??
??4、完整的技術服務報告,包括實驗步驟、使用試劑、儀器、軟件檢索參數等。
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八、實驗服務周期及收費標準:咨詢本公司
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九、質量承諾
?1、根據您的實驗目的為您設計科學合理的SILAC實驗方案;
?2、提供客觀、真實的實驗結果。
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