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輝駿生物 SILAC應用之蛋白質互作實驗 SILAC應用之蛋白質互作實驗服務

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輝駿生物 SILAC應用之蛋白質互作實驗 SILAC應用之蛋白質互作實驗服務
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企業信息
廣州輝駿生物科技股份有限公司
實名認證 企業認證
成立年份:
2008年
經營模式:
制造商,服務商
企業類型:
企業單位
主營產品:
蛋白組學技術服務,蛋白互作,雙向電泳,質譜鑒定,SILAC,DIGE,iTRAQ,病毒服務,細胞生物學,分子生物學,2D WB,COIP,生物信息學,tap/ms,ap/ms,病毒包裝
公司地址:
廣州高新技術產業開發區科學城掬泉路3號廣州國際企業孵化器D504-505
聯系方式
電話:
020-32053431
手機:
15820299506
QQ:
4006991663
郵箱:
651916946@qq.com
地址:
廣州高新技術產業開發區科學城掬泉路3號廣州國際企業孵化器D504-505
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最后更新
2025-03-26 11:53
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一、SILAC研究蛋白質相互作用概述
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SILAC?(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,?SILAC) 結合免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP),來尋找互作蛋白,是SILAC在定量蛋白質組學研究基礎上的進一步應用。基本思路是通過質譜鑒定及分析蛋白的相對表達量來判斷某一蛋白是否與誘餌蛋白特異結合,當實驗組與對照組中某個蛋白質含量達到統計學差異時,即可判定該蛋白質與誘餌蛋白質存在互作。


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二、與傳統的免疫共沉淀(CoIP)或Pulldown相比,SILAC-IP有以下優勢
??1、特異性強,假陽性極低;??????
??2高通量,液相與質譜連用,能**限度的尋找到相互作用的蛋白質;????
??3、靈敏度高;
? 4、能直接檢測出與bait蛋白互作的其它蛋白的相對含量。

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?

三、SILAC研究蛋白質相互作用技術流程

實驗流程:



不同的實驗背景和目的需對應用不同的SILAC-IP實驗方案

方案一:以正常細胞株為實驗材料
? 1. 分別用輕、重鏈氨基酸培養細胞,培養至第5~6代時取等量細胞提取蛋白質;
??2. 提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白分別用Normal IgG和抗bait蛋白的特異抗體做免疫沉淀(IP);
? 3. 混合輕、重鏈IP產物,SDS-PAGE分離;
? 4. 膠內酶切,肽段抽提、純化、鑒定和定量(圖1:成對出現的峰為非特異性結合蛋白)。

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正常細胞株的SILAC-IP實驗設計
圖1 正常細胞株的SILAC-IP實驗設計

?

方案二:以過表達bait蛋白的細胞株為實驗材料
? 1. 分別用輕、重鏈氨基酸培養正常對照細胞和過表達bait蛋白的細胞株(帶標簽),培養至第5~6代時取等量細胞混合并提取蛋白質;
? 2. 提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白均用標簽蛋白抗體做IP;
? 3. 混合輕、重鏈IP產物,SDS-PAGE分離;
? 4. 膠內酶切,肽段抽提、純化,質譜鑒定和定量(圖2:成對出現的峰強一致的峰為非特異性結合蛋白)。

?
過表達細胞株的SILAC-IP實驗設計
圖2 過表達細胞株的SILAC-IP實驗設計

?

方案三:以RNAi bait基因的細胞株為實驗材料
? 1. 分別用輕鏈、重鏈氨基酸培養RNAi bait基因的細胞株和正常對照細胞株,培養至第5~6代時取等量細胞混合并提取蛋白質;
? 2. 提取的輕鏈、重鏈細胞總蛋白均用抗bait蛋白的特異抗體做IP;
? 3. 混合輕、重鏈IP產物,SDS-PAGE分離;
? 4. 膠內酶切,肽段抽提、純化,質譜鑒定和定量(圖3:成對出現且峰強一致的為非特異性結合蛋白;由于RNAi組的細胞株內bait蛋白含量下降,因而與其相互作用的蛋白的豐度也相對較低,表現為峰強的減弱)。
RNAi細胞株的SILAC-IP實驗設計
圖3 RNAi細胞株的SILAC-IP實驗設計



四、SILAC研究蛋白質相互作用結果組成

??????????????????圖4:SILAC分析蛋白質相互作用的質譜峰圖及被鑒定蛋白的生物信息分析

?

五、SILAC研究蛋白質相互作用技術服務內容
1、細胞同位素標記;(本公司出售L、M、H型Lys和Arg)
2、樣本制備與定量;
3、SDS-PAGE分離、酶切、LC-MS/MS分析;
4、蛋白定性及定量分析;
5、互作蛋白的生物信息學分析
6、實驗報告整理。


?

六、SILAC適用
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SILAC能標記活的可傳代細胞、細菌等材料,不能標記組織、體液等樣本,詳情請咨詢我司。


?

七、實驗服務報告內容
??1、蛋白質鑒定;
??2、SILAC鑒定相互作用蛋白質的分析結果;??
??3、顧客指定蛋白質對應的質譜峰圖;??
??4、完整的技術服務報告,包括實驗步驟、使用試劑、儀器、軟件檢索參數等。


?

八、實驗服務周期及收費標準:咨詢本公司

?

九、質量承諾
?1、根據您的實驗目的為您設計科學合理的SILAC實驗方案;
?2、提供客觀、真實的實驗結果。

免責聲明:當前頁為 輝駿生物 SILAC應用之蛋白質互作實驗 SILAC應用之蛋白質互作實驗服務產品信息展示頁,該頁所展示的 輝駿生物 SILAC應用之蛋白質互作實驗 SILAC應用之蛋白質互作實驗服務產品信息及價格等相關信息均有企業自行發布與提供, 輝駿生物 SILAC應用之蛋白質互作實驗 SILAC應用之蛋白質互作實驗服務產品真實性、準確性、合法性由店鋪所有企業完全負責。世界工廠網對此不承擔任何保證責任,亦不涉及用戶間因交易而產生的法律關系及法律糾紛,糾紛由會員自行協商解決。

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法定代表人
劉郁林
經營狀態
存續(在營、開業、在冊)
注冊資本
500 萬人民幣
實繳資本
統一社會信用代碼
9144011658953088XY
組織機構代碼
58953088X
企業注冊號
440108000050768
企業類型
股份有限公司(非上市、自然人投資或控股)
登記機關
廣州市黃埔區市場監督管理局
成立日期
2011年12月07日
營業期限
2011年12月07日---
核準日期
2024年12日12日
注冊地址
廣州市黃埔區掬泉路3號D棟504房D棟505房D棟506房
經營范圍
生物產品的研發(不含許可經營項目);生物技術咨詢、交流服務;商品批發貿易(許可審批類商品除外);商品零售貿易(許可審批類商品除外);農業科學研究和試驗發展;畜牧業科學研究服務;水產業科學研究服務;生物醫療技術研究;健康科學項目研究、開發;自然科學研究和試驗發展;基因藥物研發;科技中介服務;生物技術轉讓服務;生物技術開發服務;生物診斷試劑及試劑盒的銷售(不含許可審批項目);生物產品的銷售(不含許可經營項目);生物診斷試劑及試劑盒的研發(不含許可審批項目);干細胞生物技術咨詢服務;干細胞工程系列產品的技術開發;干細胞生物技術服務;生物制品(不含疫苗)批發;血液制品制造;細胞制劑及相關產品的制備;