實驗目的：尋找靶蛋白的互作蛋白

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服務簡介：
???????TAP/MS是Co-IP/MS的“近親”，兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理類似。不同的是TAP/MS引入了2個純化標簽（strep或SBP，flag），2步純化，能有效純化裂解液中的靶蛋白及其復合物，并使非特異性蛋白的數量降至較低水平。實驗組和對照組洗脫的蛋白分別做質譜，從實驗組結果中扣除對照組中的蛋白，即可鑒定出與靶蛋白互作的蛋白。


技術優勢：
? 1、TAP/MS鑒定到的互作蛋白是細胞內與誘餌蛋白天然互作的，符合體內真實生理情況，可信度高。
? 2、采用兩步純化，能有效減少非特異蛋白的結合。


服務內容:
? 1、構建Flag-strep（或Flag-SBP）雙標簽的靶基因表達載體；
? 2、包裝慢病毒感染目的細胞，做成過表達細胞株，WB檢測表達效果（基因大于2kb時，可能導致病毒滴度不足以感染細胞系，此時如需進行加藥篩選構建穩轉細胞系，則周期預計延長3-4周）；
? 3、細胞總蛋白，經streptactin 樹脂（或strep磁珠）和anti-flag抗體兩步純化，并洗脫；
? 4、實驗組和對照組的洗脫液分別用胰酶酶解；
? 5、LC-MS/MS分析，獲得蛋白質的定量、定性信息；
? 6、實驗組結果扣除對照組中的蛋白，即可得到與靶蛋白互作的蛋白。